Предназначение
Краситель для микроскопических препаратов. Используется при окраске срезов головного и спинного мозга по Нисслю, а также для выявления тучных клеток в препаратах разных тканей человека и животных. Предпочтительна обработка парафиновых и целлоидиновых срезов.
Краткие сведения
Окраска по методу Ниссля является общеизвестной нейрогистологиче-ской методикой, позволяющей выявлять ядра нервных и глиальных клеток, а также хроматофильную субстанцию (субстанцию Ниссля, тигроидное вещество) в цитоплазме нейронов.
Использование реагента
БиоВитрум™-толуидиновый синий поставляется в виде двух растворов (А,Б). Раствор А – раствор красителя; раствор Б – модификатор для окраски по Нисслю.
Для проведения окраски по Нисслю следует добавить к 50 мл раствора А 2 мл раствора Б (модификатора для окраски по Нисслю). Растворы перемешать и профильтровать. Полученный рабочий раствор годен в течение недели, хранится при комнатной температуре.
Протокол обработки: Окраска нервной ткани по Нисслю модифицированным БиоВитрум™-толуидиновым синим.
- Удалить парафин из срезов в ксилоле и провести срезы через спирты нисходящей крепости до 800 этанола (возможный вариант обработки: орто-ксилол – 2 порции по 3-5 ми-нут, 960 этанол – 3 мин, 900 этанол – 3 мин, 800 этанол - 3 мин).
- Окрасить срезы в рабочем растворе модифицированного толуидинового синего 10 мин (нанести на срезы при помощи пипетки необходимое количество рабочего раствора красителя и оставить препараты на время окраски на ровной горизонтальной поверхности).
- Смыть краситель со срезов дистиллированной водой.
- Поместить на 5-10 с в дифференцировочный раствор (уксуснокислый спирт – 1 капля ледяной уксусной кислоты на 50 мл 960 этанола).
- Быстро сполоснуть в 960 этаноле и поместить в новую порцию 960 этанола на 1-4 мин. Процесс дифференцировки (постепенного исчезновения окраски нейропиля) желательно периодически контролировать под микроскопом не допуская высыхания препаратов.
- Остановить дифференцировку и обезводить препараты в 99% изопропаноле или абсолютном этаноле. Карбол-ксилол использовать нельзя!
- Просветлить препараты в двух порциях орто-ксилола. Время пребывания срезов в каждой порции 1-2 мин.
- Заключить в полистирол или другую синтетическую среду.
В результате окраски ядра нервных и глиальных клеток приобретают синий цвет, хроматофильная субстанция – сине-фиолетовая, нейропиль, коллагенновые волокна, эритроциты - неокрашены. Тучные клетки оболочек окрашены метахроматически (фиолетовая зернистость).
Правильная окраска препарата достижима при отсутствии перефиксации (пребывания в формалине свыше 24 ч).
Хранение
Хранить БиоВитрум™-толуидиновый синий следует в оригинальной плотно закрытой упаковке вдали от прямого света при комнатной температуре. |
